Assay Genie：大鼠TNF-α ELISpot试剂盒

肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α），也称为恶病质素，是一种由单核细胞和巨噬细胞产生的多肽细胞因子。 它作为一种多能免疫反应调节因子发挥作用，并且还是一种强效致热原。TNF-α在体内循环，响应刺激（如病原体或组织损伤），激活中性粒细胞，改变血管内皮细胞的特性，调节其他组织的代谢活动，并通过诱导局部血栓形成发挥抗肿瘤活性。此外，TNF-α抑制脂肪蛋白脂肪酶的活性，从而导致恶病质，这是一种身体消耗的状况。由于TNF-α在免疫系统中的多样化作用，它可能在许多疾病的发病机制中发挥作用。

TNF-α的产生是由淋巴因子和内毒素对巨噬细胞的作用介导的。 纯化的单核细胞在重组IL-2刺激后4小时内产生TNF-α，并且有体外证据表明，TNF-α在通过CD2和CD28刺激的T细胞中以高水平和延长的动态学表达。γ干扰素增强了TNF-α的分泌，TNF-α随后诱导或增强I类MHC抗原、GM-CSF和IL-1的特异性产生。

Assay Genie的大鼠TNF-α ELISpot是一种高度特异性的免疫分析方法，用于在接近体内环境的条件下，以最小的细胞操作分析T细胞产生的TNF-α的生成和分泌情况，能够检测到单个细胞水平的变化。该技术旨在确定在特定刺激下产生TNF-α的细胞频率，并将其与特定治疗或病理状态下的频率进行比较。利用夹心免疫酶技术，Assay Genie 大鼠TNF-α ELISpot检测方法不仅可以检测分泌的TNF-α（定性分析），还可以检测产生TNF-α的单个细胞（定量分析）。细胞分泌的TNF-α被包被抗体捕获，避免了其在上清液中的扩散、蛋白酶降解或与可溶性膜受体结合。

大鼠TNF-α ELISpot试剂盒检测原理：高度特异性地针对TNF-α的捕获抗体，包被于PVDF（聚偏氟乙烯）96孔微孔板的孔底。接下来，对微孔板进行封闭处理，以最大限度减少非抗体依赖的非特异性结合，然后进行洗涤。加入细胞悬浮液和刺激物后，将微孔板孵育，使特异性抗体能够结合任何产生的TNF-α。通过洗涤去除细胞后，加入生物素标记的检测抗体，这些抗体与之前捕获的TNF-α结合。随后，加入酶偶联的链霉亲和素，使其与检测抗体结合。经过孵育和洗涤后，将底物加入孔中，产生可被适当分析软件定量或通过显微镜手动计数的有色斑点。