ICL：双PPAR a/c激动剂AZD6610 PK 血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂依那普利

解析文章：《The effects of dual PPAR agonism compared with ACE inhibition in the BTBRob/ob mouse model of diabetes and diabetic nephropathy》

链接：https://physoc.onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.14814/phy2.13186

一、背景介绍

在全球范围内，2型糖尿病（T2D）的“流行”导致慢性肾脏病（CKD）和终末期肾病（ESRD）患者数量不断增加，这些患者最终需要透析和肾移植。糖尿病肾病（DN）是糖尿病的主要并发症之一，其特征性早期肾脏结构病变包括肾小球基底膜（GBM）增厚和系膜扩张，后期则出现更严重的肾小球瘢痕和典型的Kimmelstiel-Wilson结节形成。此外，足细胞、肾小管间质和小动脉也受到影响，表现为足细胞丢失、间质纤维化和小动脉透明变性。

为了更好地理解DN的发病机制并确定潜在的治疗靶点，需要更贴近人类DN的动物模型。BTBRob/ob小鼠模型被报道能可靠地模拟人类DN的许多典型早期病理特征，包括进行性白蛋白尿、早期系膜基质积累和肾小球足细胞丢失等。过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）在代谢性疾病（如高脂血症和胰岛素抵抗）以及糖尿病中扮演重要角色，其激动剂在T2D中显示出肾保护作用。然而，PPAR激动剂的不良副作用限制了其临床应用。

二、研究目的与假设

鉴于上述背景，本研究旨在探讨在BTBRob/ob小鼠模型中，双PPAR a/c激动剂AZD6610与血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂依那普利相比，对糖尿病肾病的潜在肾益处。研究假设，通过改善代谢控制，双PPAR a/c激动剂可能提供比ACE抑制更显著的肾保护效果。

三、材料与方法

1. 实验动物与伦理批准

实验程序获得瑞典哥德堡地区实验动物伦理委员会的批准（伦理申请号109-2012），并符合瑞典动物福利法及相关规定。

2. 动物分组与处理

BTBR.V(B6)-Lepob/WiscJ小鼠（Jackson Laboratories，货号004824）于4-6周龄时购入，并在8周龄时根据体重、空腹血糖和HbA1C水平随机分组。

对照组：BTBRob/ob小鼠（n=12）。

依那普利治疗组：BTBRob/ob小鼠，自14周龄起饮用含依那普利（200mg/l，相当于40mg/kg/天）的水（n=7）。

AZD6610治疗组：BTBRob/ob小鼠，自14周龄起先接受非降糖剂量（1μmol/kg/天），17周龄起接受降糖剂量（3μmol/kg/天）的AZD6610饮食添加（n=8）。

瘦型对照组：BTBR瘦型小鼠（n=5）。

3. 血液与尿液分析

血糖与HbA1C：使用Accu-Chek（罗氏）和HbA1C Now+（拜耳）测量。

肌酐：通过LC-MS/MS系统分析。

白蛋白排泄率（AER）：通过代谢笼收集13小时尿液，使用小鼠特异性白蛋白ELISA试剂盒（ICL，货号E-90AL）测量尿白蛋白浓度，Jaffé法测定尿肌酐。

4. GFR测量

肌酐清除率：通过公式计算。

FITC-sinistrin清除率：通过单次静脉注射FITC-sinistrin并多次尾静脉采血测量。

5. 组织病理学与免疫组化

肾组织：固定、脱水、石蜡包埋、切片，进行H&E、PAS染色及免疫组化染色（针对足细胞标记物nephrin和WT1）。

肾小球基底膜厚度：通过电子显微镜评估。

6. 实时定量PCR

基因表达分析：针对nephrin、WT1、TNFα、MCP-1和CD68等基因。

四、实验结果

1. 代谢参数

体重：所有BTBRob/ob小鼠组体重均高于同龄瘦型对照组，治疗对其无显著影响。

肝重：BTBRob/ob小鼠肝重为瘦型对照的两倍，反映肥胖诱导的肝脂肪变性。AZD6610治疗进一步增加肝重（71%）。

血糖与HbA1C：BTBRob/ob小鼠高血糖和高HbA1C水平，AZD6610治疗显著降低血糖和HbA1C，而依那普利组未达到统计学显著差异。

2. 肾功能

肌酐清除率与FITC-sinistrin清除率：均显示BTBRob/ob小鼠存在肾小球超滤，这是早期DN的特征，但两种治疗均不影响GFR。

白蛋白排泄率（AER）：BTBRob/ob小鼠AER增加13倍，AZD6610治疗无显著影响，依那普利治疗有降低趋势但在AER测量中未达统计学显著。

3. 结构改变与足细胞标记物

GBM厚度：BTBRob/ob小鼠与瘦型对照无显著差异，治疗亦无影响。

系膜基质扩张：BTBRob/ob小鼠系膜基质扩张明显，AZD6610治疗减少扩张程度，而依那普利无显著影响。

足细胞标记物：nephrin和WT1的mRNA和蛋白表达在BTBRob/ob小鼠中均降低，治疗未改善这些标记物的表达。

4. 炎症标记物

TNFα、MCP-1和CD68：BTBRob/ob小鼠与瘦型对照或治疗组间无显著差异。

5. 意外发现

依那普利治疗组：所有小鼠均出现肾小球旁器小动脉壁同心性增厚，这是一种类似恶性高血压的特征性病变，但在本模型中未伴随血压升高。

五、ICL品牌的Mouse Albumin ELISA Kit试剂盒的作用和价值

在本研究中，ICL品牌的Mouse Albumin ELISA Kit（货号E-90AL）扮演了关键角色。白蛋白尿是糖尿病肾病的重要标志，其准确测量对于评估肾功能损伤程度及治疗效果至关重要。该试剂盒通过特异性地检测小鼠尿液中的白蛋白浓度，为研究人员提供了精确、可靠的数据支持。

特异性：该试剂盒针对小鼠白蛋白设计，避免了与其他蛋白质的非特异性交叉反应，确保了测量结果的准确性。

灵敏度：高灵敏度使得该试剂盒能够检测到尿液中微量的白蛋白变化，有助于早期发现肾功能损伤。

简便性：操作简便快捷，减少了实验过程中的操作误差和时间成本。

重复性：良好的重复性确保了实验数据的稳定性和可靠性，为科学研究提供了坚实的基础。

通过使用该试剂盒，研究人员能够精确地量化BTBRob/ob小鼠模型中的白蛋白尿水平，从而评估不同治疗策略（如双PPAR a/c激动剂AZD6610和ACE抑制剂依那普利）对糖尿病肾病的治疗效果。这一工具不仅在本研究中发挥了重要作用，也为未来糖尿病肾病的研究提供了有力的技术支持。

六、结论

本研究发现，BTBRob/ob小鼠模型展现了人类DN早期变化的一些相似性，但ACE抑制或PPAR a/c激动剂提供的肾保护作用有限或无。双PPAR a/c激动剂AZD6610虽能改善代谢控制，但对白蛋白尿无显著影响；依那普利则显示出一定的降白蛋白尿效果，但伴随意外的肾小动脉壁重塑。未来研究需进一步探索这些治疗策略在DN中的潜在机制及优化方案。

通过综合运用包括ICL品牌Mouse Albumin ELISA Kit在内的多种研究工具和技术，本研究为理解DN的发病机制及探索新型治疗策略提供了宝贵的实验数据和见解。